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飼養(yǎng)層細胞的影響因素

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飼養(yǎng)層細胞的影響因素

  飼養(yǎng)層的影響,主要體現(xiàn)在飼養(yǎng)層種類、絲裂霉素處理飼養(yǎng)層的時間、飼養(yǎng)層細胞的代數(shù)和飼養(yǎng)層細胞的密度等。下面是學習啦小編精心為你整理的飼養(yǎng)層細胞的影響因素,一起來看看。

  飼養(yǎng)層細胞的影響因素

  飼養(yǎng)層種類

  STO PMEF: 對各種動物都較適宜,,但最可靠的方法還是根據(jù)動物種類篩選最佳飼養(yǎng)層為宜。有研究表明,PMEF比STO更適合用于小鼠ES(胚胎干細胞)的培養(yǎng)。

  UE(子宮上皮細胞)

  BRL(大鼠肝細胞)等

  動物種類

  需要經(jīng)過篩選來確定最適宜該種動物ES分離克隆的飼養(yǎng)層

  絲裂霉素處理滋養(yǎng)層的時間

  目前絲裂霉素(常用有絲分裂阻斷劑)處理時間在小鼠成纖維細胞上一般要求為:在37攝氏度,5%二氧化碳飽和溫度的條件下處理24h,時間過短達不到預定目的,成纖維細胞不能被成功地抑制住,時間過長則使細胞老化,活性下降,分泌因子的能力降低,從而直接影響ES細胞增殖和分化的抑制。同時處理完的清洗工作也很重要,一般要求用無鈣鎂PBS沖洗4~5遍,以確保絲裂霉素的徹底清除。

  飼養(yǎng)層細胞的代數(shù)及密度

  以小鼠成纖維細胞為例,選3~5代,密度為10^6-10^7個/ml為宜,代數(shù)過低所含雜細胞太多,代數(shù)過高則細胞活力降低。

  飼養(yǎng)層細胞的定義

  在細胞培養(yǎng)中有分化抑制作用的單層貼壁細胞

  所謂飼養(yǎng)層細胞就是指一些特定細胞(如顆粒細胞、成纖維細胞、輸卵管上皮細胞等已在體外培養(yǎng)的細胞),經(jīng)有絲分裂阻斷劑(常用絲裂霉素)處理后所得的細胞單層。是細胞培養(yǎng),尤其是胚胎干細胞培養(yǎng)常用的生長增值促進劑和分化抑制劑。

  在正常機體內(nèi),細胞除了獲得一些血液來的營養(yǎng)外,還在細胞與細胞之間互換特殊的物質(zhì),用于分裂分化和營養(yǎng)等。因而,在細胞體外培養(yǎng)中,除了正常的培養(yǎng)基外,先培養(yǎng)一層特殊的細胞,然后再在其上接種要實驗的細胞,這樣更能模擬體內(nèi)環(huán)境。這些特殊的細胞就是飼養(yǎng)層細胞,通常是成纖維類細胞,這些細胞可以提供實驗細胞更好的營養(yǎng),有的分化研究則是必須有飼養(yǎng)層細胞。

  在體外的細胞培養(yǎng)中,單個的或數(shù)量很少的細胞不易生存與繁殖,必須加入其它活的細胞才能使其生長繁殖,加入的細胞稱之為飼養(yǎng)細胞(Feeder cell)。在細胞融合和單克隆的選擇過程中,就是在少量的或單個細胞的基礎(chǔ)上使其生長繁殖成群體,因此在這一過程中必須使用飼養(yǎng)細胞。

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