飼養(yǎng)細胞的方法
飼養(yǎng)細胞的方法
在體外的細胞培養(yǎng)中,單個的或數(shù)量很少的細胞不易生存與繁殖,必須加入其它活的細胞才能使其生長繁殖,加入的細胞稱之為飼養(yǎng)細胞。下面是學(xué)習(xí)啦小編精心為你整理的飼養(yǎng)細胞的方法,一起來看看。
飼養(yǎng)細胞的方法
嚴格無菌操作,多噴噴酒精,要是對滅菌的東西不放心,自己包自己送自己烘干。
不要和別人共用試劑耗材,自己準備一套。
有可能的話在拿到新細胞的時候做好支原體衣原體檢測。
水浴鍋很臟,生化培養(yǎng)箱要是得手動加濕的話盤里的水也會很臟,勤換(滅菌水加進去)。
晚上離開的時候最好給細胞房照紫外,超凈臺是用完就開吧。
最好的是同一時間就你一個人在用細胞房在養(yǎng)細胞。
飼養(yǎng)細胞的制備
小鼠腹腔細胞含有巨噬細胞,除具有飼養(yǎng)作用外,還可清除死亡破碎細胞及微生物。取8~10周齡同系小鼠,斷頸處死后,無菌操作腹腔內(nèi)注射10~15ml完全培養(yǎng)液,用消毒拇指輕揉腹部數(shù)次后, 吸回腹腔液體,調(diào)整細胞濃度為1×105/ml。 一般一只小鼠腹腔液可獲取細胞3~5×106,可供一次融合用。亦可取兩只小鼠腹腔巨噬細胞混合使用。此外,同系小鼠脾細胞和胸腺細胞亦可作為飼養(yǎng)細胞。
選擇性培養(yǎng) 兩種親本細胞經(jīng)PEG處理后,可形成多種細胞成分的混合體,包括未融合的游離親本細胞、骨髓瘤細胞間的融合、免疫B細胞間的融合以及骨髓瘤細胞與免疫B細胞間融合的異核細胞,僅后者可形成雜交瘤,應(yīng)予以篩選出來克隆培養(yǎng)。通常應(yīng)用HAT培養(yǎng)液,其中含有次黃嘌呤H、氨基喋呤A和胸腺嘧啶核苷T。
大多數(shù)實驗室在融合當天就加入HAT培養(yǎng)液,也可次日加入。一般在融合后7~14天內(nèi)使用HAT培養(yǎng)液,然后改用HT培養(yǎng)液。融合后第2~3周進行換液,每次吸出培養(yǎng)孔舊液1/2換入新液,以后視克隆生長情況3~5天換液1次,連續(xù)2周。3~5天后未融合及自身融合的細胞逐漸死亡,1周左右可出現(xiàn)克隆,并不斷增殖,當集落>3mm或布滿孔底1/2時即可取上清作抗體活性檢測,同時補加新鮮HT培養(yǎng)液。在一次較好的融合試驗中,約70~80%孔有克隆生長。所有生長克隆的孔都需要取培養(yǎng)上清液進行抗體活性檢測。培養(yǎng)3周后即可改用普通完全培養(yǎng)液。
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