因單一克隆B細胞雜交瘤產(chǎn)生的，只識別抗原分子某一特定決定簇的特異性抗體。那么你對單克隆抗體了解多少呢?以下是由學(xué)習(xí)啦小編整理關(guān)于什么是單克隆抗體的內(nèi)容，希望大家喜歡!

　　什么是單克隆抗體

　　單克隆抗體由單一B細胞克隆產(chǎn)生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體，稱為單克隆抗體。通常采用雜交瘤技術(shù)來制備，雜交瘤(hybridoma)抗體技術(shù)是在細胞融合技術(shù)的基礎(chǔ)上，將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細胞和具有無限繁殖能力的骨髓瘤細胞融合為B細胞雜交瘤。用具備這種特性的單個雜交瘤細胞培養(yǎng)成細胞群，可制備針對一種抗原表位的特異性抗體即單克隆抗體。

　　單克隆抗體制備過程

　　1、免疫動物

　　免疫動物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產(chǎn)生致敏B淋巴細胞的 過程。 一般選用6-8周齡雌性BALB/c小鼠，按照預(yù)先制定的免疫方案進行免疫注射。 抗原通過血液循環(huán)或淋巴循環(huán)進入外周免疫器官，刺激相應(yīng)B淋巴細胞克隆，使其活化、增殖，并分化成為致敏B淋巴細胞。

　　2、細胞融合

　　采用二氧化碳氣體處死小鼠，無菌操作取出脾臟，在平皿內(nèi)擠壓研磨，制備脾細胞懸液。 將準備好的同系骨髓瘤細胞與小鼠脾細胞按一定比例混合，并加入促融合劑聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，各種淋巴細胞可與骨髓瘤細胞發(fā)生融合，形成雜交瘤細胞。

　　3、選擇性培養(yǎng)

　　選擇性培養(yǎng)的目的是篩選融合的雜交瘤細胞，一般采用HAT選擇性培養(yǎng)基。在HAT培養(yǎng)基中，未融合的骨髓瘤細胞因缺乏次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶，不能利用補救途徑合成DNA而死亡。 未融合的淋巴細胞雖具有次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶，但其本身不能在體外長期存活也逐漸死亡。 只有融合的雜交瘤細胞由于從脾細胞獲得了次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶，并具有骨髓瘤細胞能無限增殖的特性，因此能在HAT培養(yǎng)基中存活和增殖。

　　4、雜交瘤陽性克隆的篩選與克隆化

　　在HAT培養(yǎng)基中生長的雜交瘤細胞，只有少數(shù)是分泌預(yù)定特異性單克隆抗體的細胞，因此，必須進行篩選和克隆化。通常采用有限稀釋法進行雜交瘤細胞的克隆化培養(yǎng)。采用靈敏、快速、特異的免疫學(xué)方法，篩選出能產(chǎn)生所需單克隆抗體的陽性雜交瘤細胞，并進行克隆擴增。經(jīng)過全面鑒定其所分泌單克隆抗體的免疫球蛋白類型、亞類、特異性、親和力、識別抗原的表位及其分子量后，及時進行凍存。

　　5、單克隆抗體的大量制備

　　單克隆抗體的大量制備主要采用動物體內(nèi)誘生法和體外培養(yǎng)法。

　　(1)體內(nèi)誘生法 取BALB/c小鼠，首先腹腔注射0.5ml液體石蠟或降植烷進行預(yù)處理。1-2周后，腹腔內(nèi)接種雜交瘤細胞。雜交瘤細胞在小鼠腹腔內(nèi)增殖，并產(chǎn)生和分泌單克隆抗體。約1-2周，可見小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水，即可獲得大量單克隆抗體。

　　(2)體外培養(yǎng)法 將雜交瘤細胞置于培養(yǎng)瓶中進行培養(yǎng)。在培養(yǎng)過程中，雜交瘤細胞產(chǎn)生并分泌單克隆抗體，收集培養(yǎng)上清液，離心去除細胞及其碎片，即可獲得所需要的單克隆抗體。但這種方法產(chǎn)生的抗體量有限。各種新型培養(yǎng)技術(shù)和裝置不斷出現(xiàn)，大大提高了抗體的生產(chǎn)量。

　　單克隆抗體的鑒定實驗

　　1.雜交瘤細胞染色體的檢查采用秋水仙素裂解法進行。

　　2.單克隆抗體的類型、亞型的測定：購買兔抗小鼠Ig類型和亞型的標準抗血清，采用瓊脂擴散法或ELISA夾心法測定單抗的Ig類型和亞型。

　　3.單抗的特異性鑒定可以采用各種方法，如免疫熒光法、ELISA法、間接血凝和免疫印跡技術(shù)等，同時還需做免疫阻斷試驗等。

　　4.單抗的效價測定可采用凝集反應(yīng)、ELISA或放射免疫測定。不同的測定方法效價不同。培養(yǎng)上清液的效價遠不如腹水的效價。采用凝集反應(yīng)，腹水效價可達5×104。而采用ELISA檢查，腹水效價可達1.0×106。單抗的效價以培養(yǎng)上清和腹水的稀釋度表示。

　　5.必要時還可以測定單抗的親和力和識別抗原表位的能力測定。

　　一、試劑原理：

　　本試劑盒利用雙抗體夾心法鑒定小鼠淋巴細胞雜交瘤培養(yǎng)上清中單克隆抗體或特異親和純化的單克隆抗體的類和亞類(可區(qū)分出IgG1\IgG2a\IgG2b\IgG3\IgM\IgA)。采用小鼠抗體共有位點的二抗包被微孔板，與加入的培養(yǎng)上清中的小鼠抗體結(jié)合，再加入HRP標記的抗小鼠各類、亞類的抗體來分別反應(yīng)，最后用TMB底物系統(tǒng)顯色并用稀硫酸終止，再通過酶標儀檢測吸光度來判斷被測單克隆抗體的類或亞類。本試劑盒具有極高的分辨率，是您鑒定小鼠單克隆抗體類、亞類的可靠工具。

　　二、使用范圍：

　　用于小鼠單克隆抗體Ig類、亞類的鑒定以及相關(guān)內(nèi)容的研究。

　　三、使用方法：

　　1、首先將試劑盒恢復(fù)室溫(大約30分)，然后用純水把清洗液配成工作濃度(一份濃縮清洗液加19份純水)。

　　2、取出酶標板。每個標本需要6孔，陽性對照6孔。多余的用自封袋保存，記得放入干燥劑。

　　3、將細胞培養(yǎng)上清(或特異親和純化的抗體)50μl加入酶標微孔板，每個標本加6孔，陽性對照也是加6孔每孔50μl。然后每孔再加入50μl標本稀釋液。貼上封板膜37℃溫育30分鐘。

　　4、棄去板內(nèi)液體，洗板5遍后在不掉纖維的吸水材料上拍干或機洗5遍。再在每個標本的6孔中分別加入6種酶標二抗各100μl，通用陽性對照的6孔也一樣。在加樣圖上或酶標板上做好標記。貼上封板膜37℃溫育30分鐘。

　　5、吸棄板內(nèi)液體，洗板5遍后在不掉纖維的吸水材料上拍干或機洗5遍。每孔分別加入顯色劑A和顯色劑B各50μl，換一張新的封板膜貼板避光37℃顯色20分鐘。

　　6、本試劑盒特異性好一般肉眼即可觀察出結(jié)果，看顯色藍的那個孔所對應(yīng)的酶標二抗就知道此標本的Ig類或亞類。更可將反應(yīng)終止液(每孔50μl)終止反應(yīng)后用酶標儀450nm測定波長，630nm參考波長雙波長測定結(jié)果，參看高值孔所對應(yīng)的酶標二抗就知道此標本的Ig類或亞類。陽性對照0D小于0.5實驗無效，需要重做。