什么是外周血_相關介紹
什么是外周血_相關介紹
正常人外周血中一般看不見幼稚的干細胞的,只存在有極少量的造血干細胞,那么你對外周血了解多少呢?以下是由學習啦小編整理關于什么是外周血的內(nèi)容,希望大家喜歡!
什么是外周血
外周血是除骨髓之外的血液,臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細胞釋放到血液中,再從血液中提取分離得到造血干細胞,我們把這樣得到的干細胞稱為外周血干細胞 ,在二十一世紀初人類開始的生命方舟計劃中首次提出外周血這一新概念。
正常人外周血中一般看不見幼稚的干細胞的,只存在有極少量的造血干細胞,其含量為0.01%左右。如果幼稚細胞的比例大幅增加,有可能是類白血病。正因為存在0.01%的造血干細胞,可利用細胞分離的技術(血細胞自動分離機),將外周血中含有造血干細胞的單個核細胞進行分離保存,重復數(shù)次達一定細胞數(shù)量后,回輸給患者以之代替骨髓而進行的干細胞移植,稱為外周血干細胞移植。
培養(yǎng)基配制外周血
配制用水
培養(yǎng)基的大部分是水,所以水的質量直接影響培養(yǎng)基的質量。按Waymouth標準,水的電阻應為200萬歐姆,一般實驗室里以玻璃蒸餾器制備的
雙蒸水或三蒸水可以符合使用條件。
培養(yǎng)基
培養(yǎng)基有天然、人工兩種。一般實驗室使用的是RPMI-1640粉末培養(yǎng)基,以雙蒸或三蒸水配制。NaHCO3(或HCl)調(diào)pH至7.2~7.4,若pH值超
過7.6或遠低于6.8,則大多數(shù)細胞不能生長。RPMI-1640不耐高壓滅菌,使用前需經(jīng)滅菌0.22μm孔徑濾膜濾過處理。
血清
培養(yǎng)中常使用小牛血清(或胎牛血清)。血清亦不能高壓滅菌,無菌的小牛血清需在56℃水浴30分鐘滅活補體,置4℃冰箱存放待用。配制時含量視培養(yǎng)細胞種類、時間而定,一般用10—15%。由于血清成分復雜、條件不易控制,可選用無血清培養(yǎng)基。
抗菌素
為防止培養(yǎng)時期細菌的污染,可在培養(yǎng)基中添加適當抗菌素,一般用量與組織細胞培養(yǎng)相同:卡那霉素100單位/毫升,或雙抗--青霉素100單位/
毫升,鏈霉素100微克/毫升。
植物血凝素(PHA)
非增殖期的細胞不能制備染色體,如人外周血淋巴細胞,但在離體培養(yǎng)過程中,在PHA的作用下,可被刺激轉化為淋巴母細胞而進入有絲分裂。
經(jīng)實驗測定其分裂高峰分別于培養(yǎng)后44—48小時和68—72小時。
PHA有粘多糖,蛋白質兩種重要成分。粘多糖促使有絲分裂,蛋白質起凝集作用。PHA激活的細胞數(shù)隨其濃度而增加,直至全部免疫活性細胞均
被激活為止,但PHA濃度過高會引起凝集,一般采用4%濃度為好。
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