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　　高二生物下冊《血紅蛋白的提取和分離》知識(shí)梳理

　　一、基礎(chǔ)知識(shí):

　　1 、分離生物大分子的基本思路是什么?

　　2 、不同蛋白質(zhì)的特性在哪些方面存在差異?

　　3 、本課題我們將利用血紅蛋白與雜質(zhì)蛋白哪方面的差異進(jìn)行提純?

　　4 、為什么不用雞的血紅細(xì)胞而用人的血紅細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)材料?

　　5 、用什么方法分離相對(duì)分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì) ?

　　凝膠色譜法

　?、?凝膠色譜法(分配色譜法)：

　　1、什么是凝膠?

　　2、什么是凝膠色譜法?

　　學(xué)生活動(dòng)2:

　　3、凝膠色譜法的原理是什么?

　　4、請(qǐng)用自己的話總結(jié)出凝膠色譜法分離相對(duì)分子質(zhì)量不同蛋白質(zhì)的具體過程。

　　1 、什么是緩沖液?

　　2、 緩沖液的作用是什么?

　　學(xué)生活動(dòng)3:

　　3、 緩沖液是如何配置的?你所學(xué)過的人體

　　血液的緩沖液有哪些?

　　4、 本實(shí)驗(yàn)加的是什么緩沖液?為何要加緩沖液?

　　(二)、緩沖溶液

　　1 、什么是電泳?

　　2、 影響電泳遷移速度的因素有哪些?

　　學(xué)生活動(dòng)4:

　　4、電泳分離各種分子的原理是什么?

　　(三)、電泳

　　3、 如何消除電荷對(duì)電泳遷移速度的影響?

　　5 、請(qǐng)描述電泳的過程?

　　電泳檢測結(jié)果

　　二、實(shí)驗(yàn)操作

　　蛋白質(zhì)的提取和分離一般分為四步：

　　(1)樣品處理：包括洗滌紅細(xì)胞;血紅蛋白稀釋;離心等操作收集到的血紅蛋白溶液。

　　(2)粗分離：透析除去分子較小的雜質(zhì)。

　　(3)純化：通過凝膠色譜法將分子量較大的雜質(zhì)蛋白質(zhì)除去。

　　(4)純度鑒定：通過聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定。

　　(一)樣品處理

　　1、紅細(xì)胞的洗滌：

　　目的是去除雜蛋白。要加入檸檬酸鈉防止血液凝固;離心將血液分層，用膠頭吸管吸出黃色血漿;用生理鹽水洗滌。

　　2、血紅蛋白的釋放：

　　在蒸餾水和甲苯作用下，紅細(xì)胞破裂釋放

　　3、分離血紅蛋白溶液：

　　離心分層;濾紙過濾去除脂溶性沉淀層;分液漏斗分出紅色透明液體。

　　4、透析：

　　裝入透析袋并置于磷酸緩沖液中(PH為7.0)透析。

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